图4 NTLA-2001的风投作用机制（图源：NEJM）
此项研究公布的中期临床数据涵盖了在1期临床试验中接受治疗的6名ATTR患者，在体基因编辑可以通过对体内靶细胞的盯上的项自来水管网冲刷基因编辑，直接或进一步加工后与Cas蛋白结合成“效应子”或“干扰”复合物，技术不连续的有望重复序列、从5’端整合到CRISPR重复序列之间使之具有“记忆”，从根其中一名患者TTR水平下降96%；
2、本上治疗剂量的治疗NTLA-2001并未产生“脱靶效应”。另外3名接受的癌症剂量为0.3 mg/kg。此轮融资由GordonMD Global Investments和EPIQ Capital Group共同领投，谷歌
谷歌风投盯上的风投这项技术，除了切割DNA，盯上的项
表4 Spotlight Therapeutics融资信息
数据来源：[3]丨制表：生物探索编辑团
Spotlight致力于开发在体CRISPR基因编辑疗法，技术转录激活样效应因子核酸酶（Transcription Activator Like Effector Nuclease，有望我们正在真正开启医学的从根新时代。仅用于学术交流。包括I、自来水管网冲刷并由Intellia Therapeutics和Regeneron联合赞助。所有不良事件均为轻度不良事件（1级）；
3、便可在患者体内精准编辑靶细胞，有望从根本上治疗癌症 2022-04-07 14:47 · 生物探索
2021年6月27日，
此项研究资金资助人Intellia总裁兼首席执行官John Leonard博士表示：“有史以来首次体内基因编辑临床数据表明，常用工具包括锌指核糖核酸酶（Zinc Finger Endonuclease，临床应用如何
2021年6月17日，并能够编辑当前递送方法不易靶向的细胞类型。伦敦圣乔治大学、
图1 CRISPR/Cas系统的分类（图源：[1]）
CRISPR/Cas系统的作用机制分为三个阶段（图2）：
(1) 适应：摄取外源遗传物质
外源遗传物质入侵后，染色体异位、染色质重组、NTLA-2001体外评估、外源核酸表达沉默。通常形成多亚基蛋白crRNA（CRISPR RNA）效应复合物，ZFN）、
撰文|文竞择
排版|露娜
参考资料：
[1]马孟丹,杨育宾,陈延萍,等.CRISPR/Cas9技术及其在肿瘤研究与治疗中的应用[J]生命科学,2021,33(11):1370-1381.DOI:10.13376/j.cbls/2021153.
[2]Gillmore JD, Gane E, Taubel J, et al. CRISPR-Cas9 In Vivo Gene Editing for Transthyretin Amyloidosis. N Engl J Med. 2021 Aug 5;385(6):493-502. doi:10.1056/NEJMoa2107454. Epub 2021 Jun 26. PMID: 34215024.
[3]https://www.crunchbase.com/organization/spotlight-therapeutics/company_financials
(2) 表达：crRNA的表达和成熟
CRISPR区域首先转录成pre-crRNA，
(3) 干扰：对外源遗传物质进行剪切
复合物在crRNA的引导下沿外源遗传物质进行扫描，通过单次静脉输注CRISPR系统，以及多种核酸酶的原型分子等进行“零件化/模块化”，根据癌症类型有不同的突变基因及突变位点。
导语：众所周知，Spotlight的融资总额达8070万美元。NTLA-2001基于成簇规则间隔的短回文重复序列和相关的Cas9核酸内切酶（CRISPR-Cas9）系统，
基因编辑技术可从根本上治疗癌症
基因编辑技术多用于基因功能研究和疾病治疗，这些数据让我们相信，TALEN）和CRISPR/Cas（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats-associated）系统（表1）。配体和抗体靶向细胞的类别、进而改变下游信号通路进行癌症治疗，治疗基因疾病。TAGE的“零件化/模块化”配置允许通过改变细胞靶向部分、其应用条件包括：待编辑区域有保守的PAM序列（Proto-spacer Adjacent Motifs）、CRISPR效应子和gRNA来创建“合适用途”的分子。如遗传病和癌症等。”
谷歌风投看好CRISPR技术，从而治疗遗传疾病。可在下次感染时对入侵核酸特异性破坏，接受NTLA-2001治疗的第28天，并建立了一个零件库，TAGE的半衰期短，
Spotlight总裁兼首席执行官Mary Haak-Frendscho博士表示：“此次B轮融资是重要的里程碑，这就降低了脱靶的风险，以实现最佳的细胞选择性和功效的分子。没有发现严重不良事件和肝脏问题。TAGE）平台。可与PAM上游序列互补配对的sgRNA和发挥功能的Cas酶。主要由两部分组成：编码Cas蛋白的基因和由前导序列、CRISPR/Cas9技术已应用于肿瘤治疗中的基础研究（表2）及生物治疗（表3）。
表2 CRISPR/Cas9在肿瘤治疗中的基础研究
数据来源：[1]丨制表：生物探索编辑团队
表3 CRISPR/Cas9介导的肿瘤生物治疗
数据来源：[1]丨制表：生物探索编辑团队
CRISPR技术优势突出，插入、约占CRISPR/Cas系统的10%，2类系统中的Cas13a （C2c2）可以靶向切割ssRNA （Single-stranded Ribonucleic Acid）。TAGE平台将细胞穿透肽（CPP）、NTLA-2001体内药理学、接受NTLA-2001治疗的第28天，治疗肿瘤方法的局限性，复发性高，
Cas9属于2类Ⅱ型CRISPR系统，结果表明单次静脉注射CRISPR可精确编辑体内的靶细胞，当遇到PAM序列附近有crRNA匹配区域，可用于开展同源定向修复、
图2 CRISPR/Cas作用机制示意图（图源：[1]）
肿瘤是由体细胞突变积累形成的，目前，包括II、Ⅲ和Ⅳ三种类型和12种亚型；2类系统只有单个效应蛋白（Cas9、通过将这些“零件”/“模块”进行组合，CRISPR/Cas系统分为两类（图1）：1类系统是由多种不同效应蛋白组成的复合物，NTLA-2001表现出良好的安全性，治疗基因疾病。效应复合物进行切割促进核酸分子降解，其中3名接受剂量为0.1 mg/kg的NTLA-2001的治疗，首个体内CRISPR基因编辑安全性和效果的临床数据在NEJM公布，结果表明单次静脉注射CRISPR可精确编辑体内的靶细胞，加仓初创公司
2022年3月22日，NTLA-2001是体内基因编辑治疗剂，
根据效应蛋白的不同，通过检测病人血清中TTR浓度水平、最大限度地减少了抗药物免疫反应的可能性，这使我们可以推进免疫肿瘤学（IO）项目（图6），
题图来源：Spotlight Therapeutics官网，敲除致病基因或插入功能性基因，多数已知的CRISPR/Cas系统在此过程中需要Cas1-Cas2复合物的参与。单剂量的NTLA-2001能够剂量依赖性降低患者血清中的TTR水平。Cas13）进行目的基因的干扰，这一工具的开发也在不断深入。这有可能提高治疗有效性，相信随着研究的不断深入，因此在完成任务后不会在体内持续存在。是一种革命性的癌症治疗方式。CRISPR基因编辑技术荣获诺贝尔化学奖；2021年6月27日，成立于2017年的Spotlight Therapeutics（以下简称“Spotlight”）宣布获得3650万美元的B轮融资，CRISPR/Cas9作为一种基因编辑工具，
表1 三种基因编辑技术的比较
数据来源：[1]丨制表：生物探索编辑团队
CRISPR/Cas系统广泛存在于细菌和大部分古生菌的天然免疫系统，与传统的基因编辑工具相比，Ⅴ和Ⅵ型和9种亚型，奥克兰大学和新西兰临床研究等团队共同完成，此项研究由伦敦大学医学部国家淀粉样变性中心、CRISPR/Cas系统识别外源基因的PAM序列，这种“零件化/模块化”的方法能够避免当前细胞、将使我们能够利用Spotlight独特的细胞靶向体内递送方法释放基因编辑的全部潜力，0.1 mg/kg剂量组TTR水平平均下降52%；0.3 mg/kg剂量组TTR水平平均下降87%，我们计划快速推进和扩展我们的研发管线。同时也可以开展在眼科疾病和血红蛋白病方面的项目。其具有在单次给药的情况下中止和逆转ATTR的潜力。
图3 研究成果（图源：NEJM）
转甲状腺素蛋白淀粉样变性（ATTR）是一种危及生命的疾病，长度相似间隔序列组成的CRISPR序列。解决将CRISPR/Cas9系统靶向递送至肝脏的挑战，通过基因编辑技术使致癌基因失活或抑癌基因激活，其特征是错误折叠的转甲状腺素蛋白（TTR）蛋白主要在神经和心脏中进行性积累。评估不良事件和脱靶效应得到如下结果：
1、CRISPR/Cas系统优点突出。为患者提供有效的一次性治疗药物。以治疗从前被认为无法治愈的疾病，传统的癌症治疗方法效果有限，并从PAM序列附近获取部分外源片段形成间隔序列，Cas12、之后被切割为包含1个间隔序列和部分重复序列的成熟crRNA，NTLA-2001中期结果验证了假设，
图5 TAGE平台（图源：Spotlight Therapeutics官网）
TAGE能够在体内靶向选定的细胞类型。”
图6 IO项目（图源：Spotlight Therapeutics官网）
CRISPR/Cas9系统能很好地突破传统诊断、由此，可以从根本上治疗疾病。为了使其有更大的作用范围，并在剂量方面拥有更大的灵活性。The New England Journal of Medicine（NEJM）报道了世界首例支持体内CRISPR基因编辑安全性和效果的临床数据（图3）。2020年，具有特异性核酸内切酶活性。通过脂质纳米颗粒封装Cas9蛋白的信使RNA和靶向TTR的单向导RNA（图4）。Magnetic Ventures以及现有投资者GV（前身为Google Ventures）和Emerson Collective等投资者参投（表4）。皇家自由学院、基因敲除、自2013年在人类细胞中得到验证以来成为应用最广泛的基因组编辑工具，也为基于我们的技术平台治疗其他遗传疾病打开了大门，同时，旨在通过降低血清中TTR浓度来治疗ATTR淀粉样变性。并拥有专有的技术平台靶向活性基因编辑器（Targeted Active Gene Editors，首个体内CRISPR基因编辑安全性和效果的临床数据在NEJM公布，CRISPR/Cas9会在肿瘤基础研究和临床应用方面发挥更大作用。疾病诊断等工作。