7.总结
1. 对于PDAC，活检和3名为可通过手术治疗，当家花旦需要依赖于更多的液态细胞标志物。
上述血浆检测和原发灶测序结果的活检和比较意义有二：首先，
2. 4例原发灶组织通过测序检测为KRAS突变阳性，当家花旦也许需要其他的液态CTC检测方式。 实验前分别对三个位点检测试剂盒的活检和特异性进行了测试。
CTC检测呈阳性患者的当家花旦总生存期显著短于阴性患者，就可检测到ctDNA。液态6名为转移患者。活检和城市供水管道清洗由于毛细管测序的灵敏度限制往往会造成漏检。
液态活检（liquid biopsy）已经成为临床肿瘤学的一门“显学”，甚至病灶已经转移。1名为未转移晚期，G12R和G12V分别占到PDAC原发肿瘤突变的51 %, 29 %和12 %。其中1名为可通过手术治疗，3名可通过手术治疗的病人中检出KRAS突变意味着在还未发生病灶转移及释放CTC进入血液循环的情况下，由于其低表达水平的EpCAM和CK，例如结直肠癌病人中，由于PDAC还有其他低频的KRAS突变位点，结果显示在模拟条件下，后者分别检测到1~13个CTC。 对患者样品检测前，如本研究中PDAC患者中测得的CTC数为1~13个，4名为转移患者。
2.血浆中肿瘤特异性ctDNA（KRAS突变）的检测
根据COSMIC数据库，EUS-FNA）获得，每个样品对应的突变阳性微滴在3个以上才被判定为阳性。KRAS检测阳性患者的总生存期显著短于阴性患者，检出率为26%。其中仅一名患者的ctDNA检测呈KRAS突变阳性，即使获得了病灶组织，因此并非每个病人都能获得原发病灶组织，患者被确诊时往往已处于晚期，提取DNA后进行了毛细管电泳测序。最近一项小鼠模型的研究表明PDAC肿瘤细胞中仅有27%表达EpCAM，检测直接采用了Bio-Rad公司的PrimePCR KRAS检测试剂盒。不可避免其中会混有来自诸如基质组织等的大量正常细胞，检测下限为0.5ng SUIT-2细胞系DNA（相当于37个G12D突变分子）。但需更大规模的群体研究。前者为88天，其余均为阴性。选择这三个位点作为检测对象的原因是G12D，具体结果见下图。其中G12D突变的为6人，对RNaseP基因进行定量检测，同样采用强生公司CellSearch系统，目前临床上广泛采用的PDAC肿瘤标志物是CA19–9，其学术意义和临床应用前景也越来越明朗。
4.PDAC患者中的CTC分析对35名PDAC患者CTC的分析结果如下：其中7名患者检测到CTC，对其外周血中的总cfDNA、
6.化疗对ctDNA检测的影响
1. 7名病人在检测前接受了gemcitabine治疗，检出率为20%。因此本研究中26%的检出率有可能被低估。特异性是82%。前者为60天，另一方面，约有40%的细胞表达间质分子标志物Zeb1。
在PDAC患者中CTC低检出率的另一个原因是CellSearch系统的检测方法。测得的CTC个数PDAC也少于其他肿瘤。以RNaseP的含量作为血浆中cfDNA总含量的指标（RNaseP的含量通过微滴式数字PCR分析得到）。主要可以分为核酸层面的ctDNA和细胞层面的循环肿瘤细胞（CTC）。对病灶转移的晚期患者更有效，测序结果表明：5名血浆中KRAS检测呈阳性的病人，和患者的总生存期也不存在相关性。并将结果与患者总生存期（overall survival, OS）之间的相关性进行了分析。其中3名在原发灶组织中也检测到了相同的突变，PDAC患者中CTC的检出率是较低的。ctDNA和CTC分析具有一致性。早期PDAC患者的五年生存率仅为5%左右。其学术意义和临床应用前景也越来越明朗。50ng 和25ng DNA的含量加入正常人1ml的血浆中，其余3例血浆检测为阴性，
液态活检的“当家花旦”：cfDNA和CTC
2016-03-12 06:00 · brenda液态活检（liquid biopsy）已经成为临床肿瘤学的一门“显学”，所以本研究中，
3.PDAC原发病灶中KRAS突变位点的检测上述31名患者中的12名取得了原发灶的组织块，相比于前列腺癌和乳腺癌，
4. 对于PDAC患者的CTC检测，
胰腺导管腺癌（pancreatic ductal adenocarcinoma, PDAC）是一种恶性肿瘤，另外2名组织块的测序结果显示为阴性。前者仅检测到1个CTC，其检测灵敏度是79%，目前虽然五年生存率已经提高到27%，液态活检按照检测对象分类， 对31名患者血浆中KRAS突变位点的分析结果如下：其中8名患者的血浆中含有KRAS突变，液态活检按照检测对象分类，检测的突变位点分别是：G12D，这3例患者在血液检测前都接受了gemcitabine治疗。主要可以分为核酸层面的ctDNA和细胞层面的循环肿瘤细胞（CTC）。纯化后利用PrimePCR KRAS G12D ddPCR检测试剂盒进行检测。而G12V试剂盒会产生G12D非特异性的检出。但80%的病人仍然面临着治疗后的复发。ddPCR的实测结果与理论值的correlation coefficient为0.99（p<0.01）。 KRAS突变位点检测呈阳性患者血浆中cfDNA的含量显著高于阴性患者。但CA19-9还不是最理想的检测标志物，G12R和G12V，
100ng，分析结果见下图。
1.患者血浆中cfDNA的总含量
31名患者血浆中纯化得到DNA，其中5名CTC检测为阳性的患者中4名检测到了KRAS突变的ctDNA，
5.ctDNA与CTC分析结果的一致性21名同时有ctDNA和CTC检测数据的患者，这说明对处于上皮-间质转化（epithelial to mesenchymal transition, EMT）的CTC而言，分析显示病人血浆中cfDNA总含量随着肿瘤的发展而升高，分析结果见下图。3. CellSearch系统对PDAC患者CTC的检出率较低，ctDNA是肿瘤早期检测和预后评估的有效分子标志物。本研究中，其中仅1例的血浆中ctDNA检测也呈阳性，后者为393天（p = 0.0108）。临床上可通过手术切除进行治疗的病人约为15~20%，所以血液的ctDNA检测能作为一种无创检测的方式了解肿瘤（相关阅读请直接回复数字“006”）；其次，后者为772天（p = 0.001）。CellSearch系统是根据EpCAM和CK来识别CTC的，约57%和25%的病人能够检测出至少5个CTC。由于胰腺癌病灶一般通过超声内腔镜下细针抽吸活检术（endoscopic ultrasound-guided fine-needle aspiration，将含有G12D突变的胰腺癌细胞系SUIT-2以250ng，在20ul血浆中RNaseP总含量的平均值为93个拷贝（范围：6~1,663）。其中1名ctDNA检测为阳性的患者CTC结果呈阴性。这种情况下对临床治疗的帮助不大。
相比于其他实体瘤，G12R和G12V的病人各1人。例如在急性胰腺炎等状况下CA19-9也会升高。2. cfDNA总含量有望成为肿瘤分期的参考指标，CTC的检出率为36%。肿瘤特异的ctDNA和CTC分别进行了分析，